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產(chǎn)品信息
相關(guān)產(chǎn)品
GeneHero? Cas9 預(yù)制穩(wěn)轉(zhuǎn)株
GeneHero? Cas9 穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系
復(fù)能基因 提供 Cas9 核酸酶的穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系。這些細(xì)胞系能為您的 CRISPR 基因組編輯應(yīng)用提供一個(gè)方便、高效的工具。
我們會(huì)提供預(yù)制的GeneHero? Cas9 人類或小鼠穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系，如H1299或HEK293T。Cas9 核酸酶的基因已被穩(wěn)定整合到這些細(xì)胞系基因組上的 safe harbor 位點(diǎn)（圖1）。此外，我們也能將 Cas9 核酸酶基因穩(wěn)定整合到您所指定的細(xì)胞系基因組。
Cas9 核酸酶與 sgRNAs 這個(gè)組合被廣泛用于在真核細(xì)胞乃至動(dòng)物模型上生成靶向基因組修飾，包括基因敲除、突變修飾、內(nèi)源基因融合標(biāo)簽以及更多其他應(yīng)用。而基因組上的 safe harbor 位點(diǎn)整合了 Cas9 基因的單克隆人類細(xì)胞系能保證該基因表達(dá)的安全性、可靠性以及持續(xù)性。
產(chǎn)品優(yōu)勢(shì)
Cas9 穩(wěn)定整合將 sgRNA 共轉(zhuǎn)染或共轉(zhuǎn)導(dǎo)操作的需求降到最低，是高通量 sgRNA 應(yīng)用的理想選擇。
Safe Harbor 位點(diǎn)整合能確保穩(wěn)定的 Cas9 表達(dá)，同時(shí)對(duì)細(xì)胞無副作用。
單克隆細(xì)胞系能保證單一基因背景下持續(xù)的、高水平的 Cas9 表達(dá)。
可配合復(fù)能基因 GeneHero? sgRNA 克隆、sgRNA文庫以及供體克隆服務(wù)使用。
圖 1. Cas9 核酸酶穩(wěn)定表達(dá)結(jié)構(gòu)的示意圖。Cas9 核酸酶基因被裝載到到 GeneCopoeia 的人類 AAVS1 safe harbor 敲入克隆載體。該載體的結(jié)構(gòu)配合 GeneCopoeia 的safe harbor 基因敲入技術(shù)，能將 Cas9 核酸酶基因敲入到人類第19號(hào)染色體上的 AAVS1 位點(diǎn)。單克隆分離通過嘌呤霉素（Puro）藥篩實(shí)現(xiàn)。
人類基因組 AAVS1 位點(diǎn)上的穩(wěn)定整合確保了 Cas9 核酸酶基因持續(xù)穩(wěn)定的表達(dá)。通過以下的 T7 核酸內(nèi)切酶 I 錯(cuò)配酶切檢測(cè)，我們可以看到 在 AAVS1 位點(diǎn)上 的Cas9 核酸酶基因表達(dá)量及活性水平都相當(dāng)高。（圖2）
圖 2. 穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞系活性驗(yàn)證。用靶向 HUWE I 基因的 sgRNA 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染 AAVS1 位點(diǎn)穩(wěn)定整合 Cas9 核酸酶基因的人類 H1299 細(xì)胞系。24 小時(shí)后，收集細(xì)胞用于取基因組 DNA。使用GeneCopoeia IndelCheck 檢測(cè)體系擴(kuò)增sgRNA靶向的序列區(qū)，對(duì) PCR 產(chǎn)物進(jìn)行解鏈和退火處理，對(duì)照組不作處理，實(shí)驗(yàn)組用 T7 核酸內(nèi)切酶進(jìn)行錯(cuò)配酶切。實(shí)驗(yàn)組酶切產(chǎn)物跑膠獲得預(yù)期的酶切條帶，即能證明 Cas9 在這些細(xì)胞系中有活性。